丙泊酚注射液乳粒粒徑測定方法探討

丙泊酚是一種脂溶性的、用于誘導(dǎo)和維持全身麻醉的短效靜脈麻醉劑。1981年阿斯利康公司用大豆油作為載體，研制開發(fā)出脂肪乳劑的丙泊酚注射液，1986年，至今是丙泊酚載體中應(yīng)用廣泛的劑型。影響丙泊酚注射液臨床使用安全性的主要指標(biāo)之一就是粒徑，主要包括平均粒徑和不得檢出的大粒徑[1]。粒徑測定有2種技術(shù)，第1種為動態(tài)光散射技術(shù)（DLS），第2種為基于米氏散射原理的經(jīng)典光散射技術(shù)。根據(jù)這2種測定技術(shù)，市面有2種粒度測定儀，以美國PSS公司的動態(tài)激光粒度測定儀和英國馬爾文公司、貝克曼庫爾特的激光散射粒度測定儀為代表。由于原理不同，這2種粒度測定儀測定結(jié)果存在差異。

在國內(nèi)丙泊酚注射液的生產(chǎn)企業(yè)中，部分企業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中采用動態(tài)光散射法，較嚴(yán)格的限度為：平均粒徑應(yīng)為0.18～0.27μm，90％累計粒徑不得過0.4μm，大于1μm的乳粒數(shù)不得過2％，并不得檢出大于3μm的乳粒；另一部分企業(yè)照2010年版《中國藥典》“粒度和粒度分布測定法”測定，限度各不相同，主要檢查小于0.4～0.5μm與大于1μm、3μm或5μm的粒子數(shù)。本研究小組承擔(dān)企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的統(tǒng)一工作，在此對本研究內(nèi)容進(jìn)行總結(jié)。

 2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅨE“粒度和粒度分布測定法”即文獻(xiàn)[2]收載的是基于米氏散射原理的光散射法，未收載動態(tài)光散射法。所以本研究按《中國藥典》的方法進(jìn)行丙泊酚注射液乳粒粒徑的測定，并根據(jù)《中國藥典》的要求擬定限度。

 由于激光散射粒度測定儀光學(xué)參數(shù)的設(shè)置與供試品的粒度分布有關(guān)，粒徑小于10μm的微粒（丙泊酚注射液大部分粒子的粒徑在0.4μm以下）對系統(tǒng)折光率和吸光度的影響較大，必須對光學(xué)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化[3]。目前馬爾文激光散射粒度測定儀的使用面較廣，由于每個企業(yè)設(shè)置的儀器參數(shù)不一，測定結(jié)果不同，導(dǎo)致產(chǎn)品質(zhì)量無可比性。現(xiàn)以丙泊酚注射液為模型藥物，考察儀器參數(shù)的設(shè)置情況，以達(dá)到規(guī)范操作的目的，使各企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量具有可比性。

1材料

1.1儀器

 MastersizerMS2000激光散射粒度測定儀（英國馬爾文儀器有限公司）；Nicomp380型動態(tài)激光粒度測定儀（美國PSS公司）。

1.2藥品與試劑

 丙泊酚注射液（來自德國貝朗制藥有限公司、華瑞制藥有限公司、四川國瑞藥業(yè)有限責(zé)任公司、廣東嘉博制藥有限公司、西安力邦制藥有限公司、浙江九旭制藥有限公司共6個廠家13個批號產(chǎn)品，主要規(guī)格10ml∶100mg、20ml∶200mg、50 ml ∶ 500 mg 3種）；水為超純水。

2 方法與結(jié)果
2.1 Mastersizer MS2000儀器參數(shù)的考察
2.1.1 遮光度的選擇。6個生產(chǎn)廠家各自測定時所設(shè)定的遮光度值為5%～20%。本研究考察當(dāng)吸收率和折射率參數(shù)相同的情況下，5%～20%的遮光度值對乳粒測定結(jié)果產(chǎn)生何種影響，5%～20%的任何值是否都是適宜的。
方法∶將馬爾文公司的粒度測定儀的吸收率設(shè)為0.001，折射率設(shè)為1.52，通過在稀釋液（純水）中滴加丙泊酚注射液，調(diào)節(jié)遮光度分別為4.99%、10.04%、15.11%和20.02%時，乳粒粒徑測定結(jié)果見表1。 

表1結(jié)果為∶隨遮光度增加，平均粒徑依次減小，殘差依次增加。殘差是儀器自動對實際測定的平均粒徑與理論值的擬合度進(jìn)行的評價，殘差值越大說明擬合越差。乳粒測定項的設(shè)置目的是控制平均粒徑過大，是評價工藝是否優(yōu)良的一個手段。表1中遮光度為15.11%和20.02%時測得的平均粒徑偏小（理論值0.2～0.3 μm），不利于對粒徑的控制。
另，在馬爾文公司的粒度測定儀的工作指南中關(guān)于遮光度的選擇指南建議∶干法測定時將遮光度設(shè)為約5%，測定粒徑小于3～4 μm的樣品時將遮光度設(shè)為約10%，測定大于50 μm的樣品時將遮光度設(shè)為約15%。而丙泊酚注射液中大部分乳粒的粒徑均在0.4 μm 以下。
根據(jù)試驗考察結(jié)果，結(jié)合馬爾文公司的粒度測定儀的工作指南關(guān)于遮光度的選擇指南中的建議，當(dāng)遮光度設(shè)置為5%～10%的任意值，乳粒粒徑測定結(jié)果無顯著差異;而遮光度值大于15%時測得的平均粒徑偏小，不利于對粒徑的控制。因此建立的方法中遮光度可選擇范圍設(shè)為5%～10%。

2.1.2 吸收率的選擇。馬爾文公司的粒度測定儀吸收率的設(shè)置為1×10~"，即0、0.1、0.01、0.001……。6個生產(chǎn)廠家各自測定時所設(shè)定的吸收率值有0、0.001和 0.01。本研究考察當(dāng)在遮光度和折射率參數(shù)相同的情況下，設(shè)置不同的吸收率對乳粒測定結(jié)果產(chǎn)生何種影響，是否0～0.1內(nèi)的任何值都是適宜的。
方法∶將馬爾文公司的粒度測定儀的折射率設(shè)為1.52，通過在稀釋液（純水）中滴加丙泊酚注射液，調(diào)節(jié)遮光度約為15%，考察吸收率分別為0、0.001、0.01和0.1時，乳粒粒徑測定結(jié)果，見表1。即∶吸收率為0、0.001和0.01時，殘差和平均粒徑無差異;吸收率為0.1時，殘差遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于5%，說明測得的平均粒徑嚴(yán)重偏離理論值。因此吸收率可選擇范圍為0～0.01。

2.1.3 折射率的選擇。6個生產(chǎn)廠家各自測定時所設(shè)定的折射率值分別為1.47、1.52和1.57。本研究考察當(dāng)在遮光度和吸收率參數(shù)相同的情況下，設(shè)置不同的折射率對乳粒粒徑測定結(jié)果產(chǎn)生何種影響，是否1.47～1.57內(nèi)的任何折射率值都是適宜的。
方法∶將馬爾文公司的粒度測定儀的吸收率設(shè)為0.001，通過在稀釋液（純水）中滴加丙泊酚注射液，調(diào)節(jié)遮光度約為15%，考察折射率為1.47、1.52和1.57時，乳粒粒徑測定結(jié)果見表1。即∶在遮光度和吸收率不變的情況下，折射率為1.47和1.52時測得的平均粒徑和殘差無差異;折射率為1.57時，平均粒徑過大（>0.3 μm），明顯偏離真實粒徑。因此折射率可選擇范圍為1.47～1.52。

2.2 樣品測定
根據(jù)儀器參數(shù)的考察結(jié)果及《中國藥典》對乳劑粒度的要求嗎，結(jié)合實際情況，擬定標(biāo)準(zhǔn)為∶取本品，照粒度和粒度分布測定法【2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅨE第三法】檢查（若使用馬爾文公司的粒度測定儀，建議參數(shù)為吸收率0～0.01，折射率1.47～1.52，遮光度5%～10%），平均粒徑不得過0.4μm，大于1μm的乳粒不得過2%，并不得檢出大于5μm的乳粒。
采用馬爾文公司的粒度測定儀，設(shè)定遮光度為5%、折射率為1.47、吸收率為0.01，測定樣品。結(jié)果，平均粒徑為0.214～0.335μm，大于1μm和大于5μm的粒子均未檢出。
13批樣品采用經(jīng)典光散射法測定的粒徑結(jié)果見表2。

2.3動態(tài)光散射法與經(jīng)典光散射法測定結(jié)果比較

前文已述，動態(tài)光散射法與經(jīng)典光散射法對乳粒限度的規(guī)定主要差異在于對"平均粒徑"及"90%累計粒徑不得過0.4 μm"的描述。因此用動態(tài)光散射法（美國PSS公司的動態(tài)激光粒度測定儀）及經(jīng)典光散射法（英國馬爾文公司的激光粒度測定儀）分別測定各企業(yè)樣品，對這2項結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果顯示動態(tài)光散射法測得的平均粒徑普遍小于經(jīng)典光散射法測得的結(jié)果，測得的小于0.4 μm粒子的百分比普遍大于經(jīng)典光散射法測得的結(jié)果，詳見表3。

 3 討論
（1）《美國藥典》35版"附錄<729>項收載了粒徑測定的2 種光散射技術(shù)，即DLS和基于米氏散射原理的經(jīng)典光散射技術(shù)，并說明這2種技術(shù)都可以使用，能獲得可接受的結(jié)果。筆者經(jīng)過對這2種技術(shù)測定結(jié)果的比較，發(fā)現(xiàn)測得的平均粒徑及小于0.4 μm的粒子的百分?jǐn)?shù)有較大差異。因此，采用不同的測定原理，可能要設(shè)置不同的限度。因此，統(tǒng)一藥品標(biāo)準(zhǔn)，明確乳粒測定的方法、統(tǒng)一限度，才能使各生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品具有可比性。
（2）目前，即使同樣使用經(jīng)典光散射技術(shù)的馬爾文公司的激光粒度測定儀，由于各企業(yè)設(shè)置的儀器參數(shù)不同，可致測定結(jié)果不同，導(dǎo)致產(chǎn)品質(zhì)量無可比性。為了甄別哪些參數(shù)的差異會對結(jié)果產(chǎn)生影響，哪些參數(shù)的差異不會對結(jié)果造成影響，或者多大的差異才會影響結(jié)果，本次研究對3個主要的儀器參數(shù)進(jìn)行了考察。終確定了儀器參數(shù)的范圍為∶遮光度5%～10%、折射率1.47～1.52、吸收率0～0.01。在此范圍內(nèi)的參數(shù)設(shè)置，對測定結(jié)果無影響。
（3）本研究以丙泊酚注射液為示范，對乳粒粒徑測定的方法及儀器參數(shù)的設(shè)置進(jìn)行了初步探討，為今后研究類似品種如脂肪乳注射液及中長鏈脂肪乳注射液等的乳粒粒徑測定提供了研究方向及思路。參考文獻(xiàn)
【1】 彭婭，賈飛，程剛.丙泊酚及其制劑的研究進(jìn)展【J】.中國藥
劑學(xué)雜志，2012，10（1）∶17.
【2】 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典∶二部【S】.2010年
版.北京∶中國醫(yī)藥科技出版社，2010∶2、附錄74.
【3】 楊道媛，馬成良，孫宏魏，等.馬爾文激光粒度分析儀粒度
檢測方法及其優(yōu)化研究【J】.中國粉體技術(shù)，2002，8（5）∶27.
[4] The United States Pharmacopoeia Convention.USP35-NF
30[S]. Baltimore:United Book Press,Inc.,2011:1310.
（收稿日期∶2013-01-23 修回日期∶2013-03-26）