PSS粒度儀在脂質(zhì)體行業(yè)上的應(yīng)用

在醫(yī)藥和化妝品行業(yè)中脂質(zhì)體是由磷脂制作而成的小球，它的粒徑和表面電荷的檢測(cè)是非常重要的一項(xiàng)。動(dòng)態(tài)光散射是檢測(cè)亞微米脂質(zhì)體常見(jiàn)的分析技術(shù)，單顆粒光學(xué)傳感技術(shù)用于檢測(cè)大于1微米的脂質(zhì)體。Nicomp 380激光粒度儀和AccuSizer 780顆粒計(jì)數(shù)器在世界各地的實(shí)驗(yàn)室都在為脂質(zhì)體檢測(cè)粒徑和電位（zeta電位）。

介紹

脂質(zhì)體是雙層囊泡，通常用于醫(yī)藥中靶向藥物的研發(fā)。它由磷脂制成，它們的極性末端附著在非極性鏈上，自組裝成雙層囊泡，極性末端面對(duì)水介質(zhì)，非極性末端形成雙層。在醫(yī)藥行業(yè)應(yīng)用中脂質(zhì)體經(jīng)常在原料藥中使用。如果API屬于親水性，那么將進(jìn)入親水基團(tuán)內(nèi)部，如果不是，將進(jìn)入疏水基團(tuán)夾層內(nèi)，如圖1所示

圖1：給藥用脂質(zhì)體

Doxil（鹽酸多柔比星脂質(zhì)體）是批通過(guò)批準(zhǔn)使用，是一種重新配置的阿霉素。阿霉素藥品在聚乙二醇（PEG）包覆的脂質(zhì)體的親水袋。聚乙二醇有助于避免免疫系統(tǒng)的檢測(cè)和破壞，提高穩(wěn)定性，延長(zhǎng)循環(huán)中的半衰期。 脂質(zhì)體的其他應(yīng)用包括：生物技術(shù)(siRNA[小干擾核糖核酸]傳遞、抗體傳遞)和美容(乳劑和乳膏等領(lǐng)域的應(yīng)用)。

脂質(zhì)體的分類(lèi)和它的層數(shù)（單層或者多層）、大?。ㄐ⌒汀⒋笮突蚓薮笮停┮约爸苽浞绞接嘘P(guān)，脂質(zhì)體的主要類(lèi)型是小型單層囊泡（SUV），小型多層囊泡（SMV），多層囊泡（MLV），大型單層囊泡（LUV），和巨型多層囊泡（GMV）。

脂質(zhì)體的粒徑和加入脂質(zhì)體中藥物的數(shù)量，是在藥物的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)參數(shù)中起著關(guān)鍵作用。因此，和快速地測(cè)量脂質(zhì)體的大小對(duì)于新的和有效的藥物傳遞系統(tǒng)是*的。

大多數(shù)脂質(zhì)體都是亞微米(20~250nm)，的粒徑分析技術(shù)是動(dòng)態(tài)光散射(DLS)技術(shù)，如圖2所示。

圖2：Nicomp 380 N3000 激光粒度儀

一些新的較大的GMV脂質(zhì)體對(duì)于Nicomp 380 N3000激光粒度儀來(lái)說(shuō)太大了(>5µm)，可以用AccuSizer單粒子光學(xué)技術(shù)(SPOS)系統(tǒng)測(cè)量，如圖3所示。

圖3：AccuSizer 780 A2000 SIS顆粒計(jì)數(shù)器

研發(fā)過(guò)程中的數(shù)據(jù)檢測(cè)

在研發(fā)制造過(guò)程中，如通過(guò)濾膜擠壓，Nicomp 380 N3000激光粒度儀 和AccuSizer 780 A2000 SIS顆粒計(jì)數(shù)器都被用來(lái)地檢測(cè)脂質(zhì)體的粒徑。組結(jié)果，如圖4至圖6所示，脂質(zhì)體通過(guò)小尺寸的過(guò)濾器擠出后Nicomp 380 N3000激光粒度儀的粒徑檢測(cè)結(jié)果。

圖4：脂質(zhì)體擠出前粒徑檢測(cè)結(jié)果

圖5：脂質(zhì)體通過(guò)0.4μm濾膜擠出三次后的檢測(cè)結(jié)果

圖6：脂質(zhì)體通過(guò)0.1μm濾膜擠出三次后的檢測(cè)結(jié)果

采用糖摻雜脂膜水化法制備了巨型多層囊泡脂質(zhì)體。 然后通過(guò)離心和通過(guò)膜過(guò)濾器擠壓來(lái)減小尺寸。 用AccuSizer 780 A2000 SIS顆粒計(jì)數(shù)器檢測(cè)脂質(zhì)體粒徑大小的變化，如圖7至圖10所示。

圖7：離心過(guò)濾前GMV（巨型多層囊泡）脂質(zhì)體

圖8：離心過(guò)濾后GMV（巨型多層囊泡）脂質(zhì)體

圖9：通過(guò)5μm濾膜寄出后的GMV（巨型多層囊泡）脂質(zhì)體

圖10：通過(guò)10μm濾膜擠出后的GMV（巨型多層囊泡）脂質(zhì)體

陽(yáng)離子包覆脂質(zhì)體

由陽(yáng)離子脂質(zhì)組成的脂質(zhì)體吧DOTAP，已被證明是陰離子RNA和DNA核苷酸的有效載體。 陽(yáng)離子脂質(zhì)體提供的優(yōu)點(diǎn)包括核苷酸的高包封效率和由于脂質(zhì)雙層上的整體陽(yáng)離子靜電電荷而產(chǎn)生的高細(xì)胞攝取，為了防止血清誘導(dǎo)的聚集，陽(yáng)離子脂質(zhì)體被聚乙二醇化以增加循環(huán)壽命，并允許在腫瘤組織中積累。

在加州大學(xué)戴維斯分校上制備和研究的陽(yáng)離子脂質(zhì)體含有陽(yáng)離子脂質(zhì)DOTAP，用于微RNA的包封。 脂質(zhì)體的大小是至關(guān)重要的，因?yàn)榻K這些脂質(zhì)體被靜脈注射到小鼠體內(nèi)。 因此，終尺寸不應(yīng)大于100nm左右。 這些陽(yáng)離子包覆脂質(zhì)體的尺寸結(jié)果如圖11所示。

圖11：陽(yáng)離子包被脂質(zhì)體粒徑檢測(cè)結(jié)果

長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體

在加州大學(xué)戴維斯分校的Ferrara實(shí)驗(yàn)室研究的另一個(gè)脂質(zhì)體被標(biāo)記為⁶⁴Cu，作為納米示蹤劑，通過(guò)正電子發(fā)射斷層掃描(PET)來(lái)改善頭頸部腫瘤的可視化。 這種脂質(zhì)體是一種特殊的制劑，是HSPC/膽固醇/DSPE-PEG2K的標(biāo)準(zhǔn)化組合，它創(chuàng)造了一種高度穩(wěn)定、長(zhǎng)循環(huán)的脂質(zhì)體(LCL)，有利于許多不同的應(yīng)用。 本配方采用HSPC/膽固醇/DSPE-PEG2K的摩爾比為55.5mol：39mol：5.0moll，然后用6-BAT-PEG-脂質(zhì)對(duì)⁶⁴Cu進(jìn)行功能化放射性標(biāo)記。 ⁶⁴Cu脂質(zhì)體在各種癌癥中積累，并提供了一種敏感的示蹤劑和納米療法生物分布的指示。

⁶⁴Cu 脂質(zhì)體粒徑數(shù)據(jù)如圖12所示。

圖12：⁶⁴Cu標(biāo)記的LCL脂質(zhì)體粒徑檢測(cè)結(jié)果

溫度敏感脂質(zhì)體

此外，溫度敏感脂質(zhì)體已被制備，以提高熱誘導(dǎo)釋放這些粒子的內(nèi)容物在特定的目標(biāo)位點(diǎn)。 在一項(xiàng)研究中，在含有溫度敏感脂質(zhì)體(LTSLs)的裂解脂質(zhì)核心中，阿霉素(Dox)和銅(CuDox)之間形成了pH敏感復(fù)合物。這些脂質(zhì)體由DPPC：DSPE-PEG2k：MPPC（86：4：10，摩爾比）組成，其中DPPC為1，2-二脂?；?/font>-sn-甘油-3-磷酸膽堿，DSPE-PEG2k為1，2distearoyl-snglycero-3-phosphoethanolamine-N-Methoxy聚乙二醇-2000，MPPC為1-棕櫚?；?/font>-2-羥基-sn-甘油-3-磷酸膽堿。 將銅TEA脂質(zhì)體(銅(II)葡萄糖酸銅、三甘氨酸胺(TEA)與非包封銅TEA分離，誘導(dǎo)脂質(zhì)體膜上的鹽梯度。 MPPC-Copper TEA脂質(zhì)體的大小如圖13所示。

圖13：MPPC-Copper TEA脂質(zhì)體

一旦這些脂質(zhì)體的制備和大小被驗(yàn)證，它們就被負(fù)載在治療藥物阿霉素中，使用TEA梯度-阿霉素進(jìn)入脂質(zhì)體中，當(dāng)TEA出來(lái)時(shí)。

ZR-89標(biāo)記脂質(zhì)體的Zeta電位

在另一項(xiàng)研究中，建立了Zr-89標(biāo)記脂質(zhì)體，以評(píng)價(jià)長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體在一周內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)。 放射性被隔離在親水性?xún)?nèi)腔、脂質(zhì)雙層或脂質(zhì)體表面。 本研究中的脂質(zhì)體是在Nicomp 380 N3000 激光粒度儀上測(cè)量的，其尺寸分布范圍為114-120nm。 用相位分析光散射模式(PALS)在Nicomp上測(cè)量了Zeta電位。 測(cè)量設(shè)置包括在電極之間的0.4厘米間隙施加12V/cm電場(chǎng)，并使用Smoluchowski極限。 多個(gè)測(cè)量結(jié)果如圖14所示。

圖14：NH2-Peg2K脂質(zhì)體的Zeta電位檢測(cè)結(jié)果

注意重復(fù)測(cè)量的一致的結(jié)果。